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T4 DNA Ligase

  • Cat.No.ON-157
  • Cas.No.
  • 来源重组大肠杆菌
  • 纯度>95% by SDS-PAGE
  • 储存条件-20℃
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产品描述:T4 DNA ligase能够催化双链DNA或RNA中的5'-磷酸和3'-OH发生反应,形成磷酸二酯键。T4 DNA ligase还能够修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链中单链的缺口,可以连接粘末端,也可以连接平末端,反应时需要ATP的参与。

来源:重组大肠杆菌

规格:400U/μL

活性单位定义:1单位活性定义为16℃、30分钟内,连接50% 6μg λ-HindIII DNA 所需的酶量。

酶存储缓冲液:10mM Tris-HCl (pH7.4, 25℃), 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, and 50% (v/v)Glyercol.

配套溶液:10X T4 DNA Ligase Reaction Buffer, Cat#ON-158, 500mM Tris-HCl pH7.5, 25℃, 100mM MgCl2, 10mM ATP, 100mM DTT


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1. 文献报道连接条件的多样性。平末端连接通常连接的适宜温度是15-20℃,时间是4-18h,而粘末端连接的适宜条件是室温(22℃)3hr或者4-8℃过夜。

2. 由于PEG质量的多样性,在连接反应中不推荐使用PEG。另外,克隆时使用PEG可能会带来环化,并且残留的PEG会抑制后续反应。

3. 连接反应需要控制质粒与插入片段的比例为1:3,以5kb质粒和1kb插入DNA为例完成下列连接反应:   

ComponentAmount
Nuclease-free H2Oto 20μL
Vector DNA100ng
Insert DNA60ng
10×T4 DNA ligase reaction buffer2μL
T4 DNA ligase1μL

室温反应3h或者4℃过夜或者16℃ 4-18h。

储藏温度:-20℃

质控检测:无DNase、Nickase、RNase污染

纯度:SDS-PAGE纯度:大于95%

1. Rossella Rossi, Alessandra Montecucco, et al. Nucleic Acids Research. 25, 2106–2113 (1997).

2. Xinxin Liu, Anliang Huang, et al. Protein Expression and Purification. 109, 79-84(2015).


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