产品描述:M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus是一种以RNA为模板的DNA聚合酶, 无RNase H活性。在RNase H区域进行点突变,增加了酶的热稳定性,并且和野生型M-MLV Reverse Transcriptase相比,能够得到更多量的全长cDNA。
来源:重组大肠杆菌
规格:200U/μL
活性单位定义:1单位活性定义为37℃、10分钟内,掺入1nmole的dNTP到酸性不溶物质所需的酶量。
酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃), 0.1mM EDTA, 200mM NaCl, 0.01% NP-40, 1mM DTT and 50% Glycerol.
配套溶液:5×RT Reaction Buffer. Cat#ON-067, 250mM Tris-HCl (pH8.3, 25℃),375mM KCl, 15mM MgCl2, 50mM DTT.
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反应体系:
1. 在合成第一链DNA之前,将引物(约0.5μg)与模板(最高2μg)预先加热70℃ 5min ,冰浴5min。加热可以打开模板中的二级结构,冷却是阻止二级结构的再次形成。
2. 向已经退火的引物/模板添加下述溶液:
M-MLV reverse transcriptase, RNase H minus | 50-200U |
5×RT Reaction Buffer | 5μL |
RNasin | 20U |
dNTP (10mM each) | 1.25μL |
Total | 25μL |
3. 42℃ 反应60min。
储藏温度:-20℃
质控检测:无DNase、Nickase、RNase污染
纯度:SDS-PAGE纯度:大于95%
1. Yu Chen, Weiguo Xu,Qining Sun, Biotechnol Lett. 31, 1051–1057 (2009).
2. Shufeng Liu, Stephen P. Goff, et al. FEBS Letters. 580, 1497-1501(2006).
3. Monica J. Roth, Naoko Tanese, and Stephen P. Goff, The Journal Of Biological Chemistry. 260, 9326-9335(1985).