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M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus

  • Cat.No.ON-076
  • Cas.No.
  • 来源重组大肠杆菌
  • 纯度>95% by SDS-PAGE
  • 储存条件-20℃
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产品描述:M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus是一种以RNA为模板的DNA聚合酶, 可以长片段mRNA为模板合成dDNA。M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus 能够以单链DNA为模板进行延伸,无需添加DNA polymerase。

来源:重组大肠杆菌

规格:200U/μL

活性单位定义:1单位活性定义为37℃、10分钟内,掺入1nmole的dNTP到酸性不溶物质所需的酶量。

酶存储缓冲液:50mM Tris-HCl pH 7.5, 25℃, 0.1mM EDTA,100mM NaCl, 0.1% Triton X-100, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol.

配套溶液:5×RT Reaction Buffer. Cat#ON-067, 250mM Tris-HCl (pH8.3, 25℃),375mM KCl, 15mM MgCl2, 50mM DTT.

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5×RT Reaction Buffer, Cat#ON-067

反应体系:

1. 在合成第一链DNA之前,将引物(约0.5μg)与模板(最高2μg)预先加热70℃ 5min,冰浴5min。加热可以打开模板中的二级结构,冷却是阻止二级结构的再次形成。

2. 向已经退火的引物/模板添加下述溶液:

M-MLV reverse transcriptase, RNase H plus50-200U
5×RT Reaction Buffer5μL
RNasin20U
dNTP (10mM each)1.25μL
Total25μL

3. 37℃ (若使用随机引物)60min,或者42℃(若使用其它引物)60min. 延伸温度可以在37℃和42℃之间优化。

储藏温度:-20℃

质控检测:无DNase、Nickase、RNase污染

纯度:SDS-PAGE纯度:大于95%

1. Yu Chen, Weiguo Xu,Qining Sun, Biotechnol Lett. 31, 1051–1057 (2009).

2. Monica J. Roth, Naoko Tanese, and Stephen P. Goff, The Journal Of Biological Chemistry. 260, 9326-9335(1985).

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