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Alkaline Phosphatase,TAB5

  • Cat.No.ON-179
  • Cas.No.
  • 来源重组大肠杆菌
  • 纯度>90% by SDS-PAGE
  • 储存条件-20℃
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产品描述:Alkaline Phosphatase, TAB5 非特异性的催化DNA和RNA 5'和3'端的磷酸单酯键,也可以催化NTPs和dNTPs。80℃ 2 min可完全失活。

来源:重组大肠杆菌

规格:2.5U/μL

活性单位定义:1单位活性定义为37℃,30分钟内,对限制性内切酶作用的5'端内陷的1μg pUC19 质粒去磷酸化所用的酶量。去磷酸化定义为在自连反应中对自身环化的抑制率> 95%,通过转化到DH5α进行判断。

酶存储缓冲液:10mM Tris-HCl , 1mM MgCl2, 0.01mM ZnCl2, 50%(v/v) glycerol, pH7.4, 25℃.

配套溶液:10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180, 500mM Bis-Tris-Propane-HCl , 10mM MgCl2, 1mM ZnCl2, pH6, 25℃.


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10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180

反应流程:

DNA为底物:

1. 按下列配方配置反应液:

5'-Phosphate-DNA1μg
10X Phosphatase Reaction Buffer2μL
Alkaline Phosphatase, TAB52.5~5 units
Nuclease-free H2OTo 20μL

2. 37度保温30分钟

3. (可选)80度2分钟热失活Alkaline Phosphatase, TAB5。

RNA为底物:

1. 按下列配方配置反应液:

5'-Phosphate-RNA1μg
Nuclease-free H2OTo 15μL

2. 65度保温5~10分钟,然后立刻放冰上

3. 反应管中加入如下试剂

15μLHeat denatured RNA from step 1 (above)
2μL10X Phosphatase Reaction Buffer
2.5~5 unitsAlkaline Phosphatasae, TAB5
20 unitsRNase inhibitor (Recommend)
20μLTotal reaction volume


4. 37度保温30分钟


5. 选用下列一种方式终止反应:

A)直接放入-20度或-70度冰箱;

B)加入EDTA至终浓度大于2mM;

C)酚氯仿抽提,然后盐/醇沉淀RNA

储藏温度:-20℃

质控检测:无DNase、Nickase、RNase污染

纯度:SDS-PAGE纯度:大于90%

1. Maria Rina, Charalambos Pozidis, et al. Eur. J. Biochem. 267, 1230-1238 (2000).

2. Ellen Wang, Dimitris Koutsioulis, et al. J. Mol. Biol. 366, 1318-1331(2007).

3. Ping Li, Jon Beckwith, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.85,7685-7689(1988).

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