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T7 RNA polymerase (50U/ul)

T7 RNA 聚合酶 (50U/ul)
规格
GMP
目录号
ON-004-G
纯度
>95% by SDS-PAGE
储存条件
-20℃
来源
重组大肠杆菌

产品描述:T7 RNA Polymerase 是一种噬菌体编码的以 DNA 为模板的 RNA 聚合酶。它识别特殊的启动子——T7 启动子,以 5'-3' 的方向合成 RNA。T7 RNA Polymerase 的分子量为 99kD,并由 883 个氨基酸构成。

来源:重组大肠杆菌

规格:50U/μL 或客户定制

活性单位定义:1 单位活性定义为 37℃、60 分钟内,掺入 1 nmol 的 rATP 到酸性不溶物质所需的酶量。

酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl PH 7.9,100mM NaCl,10mM DTT,0.1% Triton X-100,1mM EDTA,50%(v/v) Glycerol。

配套溶液:10X IVT Reaction Buffer(Cat#ON-062),400mM Tris PH7.9,100mM DTT,20mM Spermidine,60mM MgCl2

10X IVT Reaction Buffer without Mg2+(Cat#ON-041),400mM Tris PH7.9,100mM DTT,20mM Spermidine。

1. T7 RNA 聚合酶对盐抑制极其敏感,总体盐浓度最好不超过 50mM。

2. 为了获得更高的 RNA 产量:

1)可以通过提高 NTP 浓度(每个浓度可达 10mM);
2)Mg2+ 浓度应高于 NTP 总浓度 4~10mm;
3)将 T7 RNA 聚合酶提高到 3 万单位/mL;
4)另外,无机焦磷酸酶添加到最终浓度为 4 单位/mL。

3. 即使储存在 -20°C,随着时间的推移,酶活性仍会明显降低,可能是由于反应缓冲液中 DTT 的分解造成的。

若出现产量下降,试着向反应液中添加 20mM DTT。或者配制无 DTT 的反应缓冲液,完成反应时加入新鲜 DTT。

储藏温度:-20℃

质控检测:无 DNase、Nickase、RNase 污染

纯度:SDS-PAGE 纯度:大于95%

1. Chamberlin, M., McGrath, J. & Waskell, L. Nature 228, 227–31 (1970).

2. Davanloo, P., Rosenberg, A. H., Dunn, J. J. & Studier, F. W. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81, 2035–9 (1984).